Рубрики
Диагностичекий

Испытания сибиреязвенных флуоресцирующих иммуноглобулинов, предназначенных для выявления возбудителя сибирской язвы Текст научной статьи по специальности «Прочие медицинские науки»

Иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие сибиреязвенные споровые

Испытания сибиреязвенных флуоресцирующих иммуноглобулинов, предназначенных для выявления возбудителя сибирской язвы Текст научной статьи по специальности «Прочие медицинские науки»

Аннотация научной статьи по прочим медицинским наукам, автор научной работы — Лобач Р. Н., Абдрашитова А. С., Саяпина Л. В.

В работе были изучены чувствительность, специфическая активность и специфичность иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих сибиреязвенных вегетативных и споровых адсорбированных. Установлена высокая специфическая активность исследуемых сибиреязвенных иммуноглобулинов в рабочем разведении 1:64, что подтверждается ярким зеленовато-желтым свечением оболочки микробной клетки интенсивностью на 3-4 креста в 93,8% мазков. Чувствительность препаратов, при которой возбудитель сибирской язвы может обнаруживаться в минимальной концентрации, составила 5,0*10 5 спор/ мл. Полученные данные свидетельствовали о том, что препараты обладают достаточно высокой специфичностью по отношению к близкородственным микроорганизмам, которая была отмечена в 75% (вегетативные) и 96,9% (споровые) исследуемых проб. Воспроизводимость постановки реакция иммунофлуоресценции при исследовании положительных и отрицательных проб во всех случаях составила 100%. В исследованиях доказано преимущество проведения реакции иммунофлуоресценции с помощью флуоресцирующих иммуноглобулинов по времени учета результатов 2,5-3 ч при исследовании проб объектов окружающей среды и биологического материала против 40 ч методом теста на гемолиз. На основании данных, полученных в медицинских исследованиях, препараты зарегистрированы в Российской Федерации в качестве изделия медицинского назначения.

Похожие темы научных работ по прочим медицинским наукам, автор научной работы — Лобач Р. Н., Абдрашитова А. С., Саяпина Л. В.

Диагностическая эффективность иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих сибиреязвенных вегетативных адсорбированных по данным медицинских испытаний

Получение поликлональных антител к белкам S-слоя B. anthracis и изучение их специфичности в иммуноферментном анализе

Testing anthrax fluorescent immunoglobulins for the detection of Bacillus anthracis

The present article describes the evaluation of sensitivity, specific activity and specificity of anthrax vegetative and spore diagnostic fluorescent adsorbed immunoglobulins. High specific activity of the test anthrax immunoglobulins in experimental dilution 1:64, which is confirmed by a bright greenish-yellow bacterial cell membrane luminescence with intensity of 3-4 cross in 93.8% of the swabs. The sensitivity of preparations in which Bacillus anthracis can be found in the lowest concentration is 5,0*10 spores/ml. The experimental data confirms that the preparations possess relatively high specificity with respect to the closely related microorganisms, which was observed in 75% (vegetative) and 96.9% (spore) test samples. The repeatability of performing immunofluorescence reaction with positive and negative samples in all cases was 100%. The present study shows the advantage of performing immunofluorescence reaction using fluorescent immunoglobulins at the time of result recording of 2.5-3 hours when assessing the samples of the environment and biological material against 40 hours hemolysis test method. Based on the results of medical research the preparations were registered in the Russian Federation as a medicinal products.

Текст научной работы на тему «Испытания сибиреязвенных флуоресцирующих иммуноглобулинов, предназначенных для выявления возбудителя сибирской язвы»

5 Испытания сибиреязвенных

£ предназначенных для выявления

| возбудителя сибирской язвы

^ Лобач Р. Н.,1 Абдрашитова А. С.,2 Саяпина Л. В.3

I 1ФГКУ «294 Центр спасательных операций особого риска» МЧС РФ (ФГКУ «294 ЦСООР»), Москва

5 2 ФКУЗ Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб»

Ф 3 Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств

Медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва

Testing anthrax fluorescent immunoglobulins for the detection of Bacillus anthracis

Lobach R. N.1, Abdrashitova A. S.2, Sayapina L. V.3

1 State-owned Federal State Institution «294 Center of rescue operations with special risks» of the Ministry of the Russian Federation for Civil Defense, Emergency Management and Natural Disasters Response, Moscow

2 Federal State-owned Healthcare Institution Russian Research Anti-Plague Institute «Microbe»

Of the Federal Service on Customers’ Rights Protection and Human Well-being Surveillance, Saratov

3 Federal State Budgetary Institution «Scientific Centre for Expertise of Medical Application Products» of the Ministry of Health of the Russian Federation, Moscow

В работе были изучены чувствительность, специфическая активность и специфичность иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих сибиреязвенных вегетативных и споровых адсорбированных. Установлена высокая специфическая активность исследуемых сибиреязвенных иммуноглобулинов в рабочем разведении 1:64, что подтверждается ярким зеленовато-желтым свечением оболочки микробной клетки интенсивностью на 3-4 креста в 93,8% мазков. Чувствительность препаратов, при которой возбудитель сибирской язвы может обнаруживаться в минимальной концентрации, составила 5,0*105 спор/ мл. Полученные данные свидетельствовали о том, что препараты обладают достаточно высокой специфичностью по отношению к близкородственным микроорганизмам, которая была отмечена в 75% (вегетативные) и 96,9% (споровые) исследуемых проб. Воспроизводимость постановки реакция иммунофлуоресценции при исследовании положительных и отрицательных проб во всех случаях составила 100%. В исследованиях доказано преимущество проведения реакции иммунофлуоресценции с помощью флуоресцирующих иммуноглобулинов по времени учета результатов — 2,5-3 ч при исследовании проб объектов окружающей среды и биологического материала против 40 ч методом теста на гемолиз. На основании данных, полученных в медицинских исследованиях, препараты зарегистрированы в Российской Федерации в качестве изделия медицинского назначения. Ключевые слова: иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие сибиреязвенные, испытания препаратов, Bacillus anthracis, Bacillus spp.

Библиографическая ссылка: Лобач Р. Н., Абдрашитова А. С., Саяпина Л. В. Испытания сибиреязвенных флуоресцирующих иммуноглобулинов, предназначенных для выявления возбудителя сибирской язвы // Биопрепараты. 2013. № 4. С. 29-34.

The present article describes the evaluation of sensitivity, specific activity and specificity of anthrax vegetative and spore diagnostic fluorescent adsorbed immunoglobulins. High specific activity of the test anthrax immunoglobulins in experimental dilution 1:64, which is confirmed by a bright greenish-yellow bacterial cell membrane luminescence with intensity of 3-4 cross in 93.8% of the swabs.

The sensitivity of preparations in which Bacillus anthracis can be found in the lowest concentration is 5,0*10 spores/ml. The experimental data confirms that the preparations possess relatively high specificity with respect to the closely related microorganisms, which was observed in 75% (vegetative) and 96.9% (spore) test samples. The repeatability of performing immunofluorescence reaction with positive and negative samples in all cases was 100%. The present study shows the advantage of performing immunofluorescence reaction using fluorescent immunoglobulins at the time of result recording of 2.5-3 hours when assessing the samples of the environment and biological material against 40 hours hemolysis test method. Based on the results of medical research the preparations were registered in the Russian Federation as a medicinal products. Keywords: anthrax fluorescent immunoglobulins, evaluation of preparations, Bacillus anthracis, Bacillus spp. Bibliographic description: Lobach R. N., Abdrashitova A. S., Sayapina L. V. Testing anthrax fluorescent immunoglobulins for the detection of Bacillus anthracis // Biopreparation (Biopharmaceuticals). 2013. № 4. P. 29-34.

Саяпина Л. В. — главный эксперт Управления экспертизы противобактериальных МИБП

Центра экспертизы и контроля МИБП ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России.

Адрес: ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России

119002, Москва, пер. Сивцев Вражек, 41,

Статья поступила 29.05.2013 г, принята к печати 22.08.2013 г

За последние 5 лет заболеваемость сибирской язвой на территории России несколько стабилизировалась, однако все еще остается на высоком уровне, что дает основание прогнозировать на ближайшие годы неблагоприятную эпидемическую ситуацию [2, 8]. Одной из главных причин имеющегося эпидемиологического неблагополучия по сибирской язве является способность возбудителя образовывать во внешней среде устойчивые споры, что обуславливает не только дальнейшее сохранение возбудителя в анабиотическом состоянии, но и возможность размножаться и накапливаться в почве. При определенных условиях это способствует созданию долговременных активных почвенных очагов и потенциально опасных территорий и может приводить к постоянной угрозе заражения, развития эпизоотий и эпидемий. Кроме этого, существует возможность завоза инфицированных животных, сырья и продуктов животного происхождения, контаминированных спорами возбудителя, из неблагополучных по сибирской язве стран [3].

Учитывая спорообразующую способность возбудителя сибирской язвы и длительное пребывание в таком состоянии во внешней среде, вопрос своевременного выявления В. anthracis является весьма актуальным [6, 7]. При этом возникает острая необходимость в проведении лабораторной диагностики стандартными препаратами с целью индикации возбудителя сибирской язвы в чистых культурах, а также в различных объектах окружающей среды: почва, подстилка, вода, продовольственное сырье, фураж, продукты животного происхождения [5]. Недостаточное обеспечение лабораторных служб зарегистрированными препаратами ставит эту проблему в число приоритетных для практического здравоохранения [1, 10]. В России до 2010 г для индикации возбудителя сибирской язвы применялись только 2 препарата, которые были зарегистрированы в установленном порядке, тест-система ГенСИБ (Рос-

Сия) и набор реагентов «АмплиСенс® B. anthracis-FRT» (Россия). Из современных методов серологической диагностики наиболее доступной, быстрой и надежной является реакция иммунофлуоресценции (РИФ) [4, 9].

Таким образом, актуальность нашей работы обусловлена существованием на территории России более 35 тыс. стационарно неблагополучных пунктов по сибирской язве, создающих потенциальную возможность ухудшения эпидемической обстановки, а также отсутствием диагностических препаратов, предназначенных для индикации возбудителя сибирской язвы, прошедших регистрацию в Российской Федерации.

В Ставропольском научно-исследовательском противочумном институте (СтавНИПЧИ) для обнаружения вегетативной и споровой форм Bacillus anthracis в мазках из чистых культур, а также в различных объектах окружающей среды и биологическом материале с помощью РИФ разработаны иммуноглобулины флуоресцирующие сибиреязвенные вегетативные и споровые адсорбированные. Испытуемые препараты представляли собой меченную флуоресцеином-изотиоцианатом (ФИТЦ) иммуноглобу-линовую фракцию к водорастворимому антигену споровой или вегетативной форм Bacillus anthracis, выделенные из гипериммунных кроличьих сывороток и адсорбированные на основе магноиммуносорбентов водорастворимыми антигенами штаммов Bacillus cereus 8, Bacillus cereus 104, Bacillus cereus 111, Bacillus megaterium 6.

Целью работы явилось изучение диагностической ценности (специфическая активность, чувствительность, специфичность, воспроизводимость) сибиреязвенных флуоресцирующих иммуноглобулинов в РИФ.

Материалы и методы

В работе были изучены экспериментальные серии иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих

Сибиреязвенных вегетативных и споровых адсорбированных. Учитывая, что в практическом здравоохранении отсутствуют аналоги зарегистрированных препаратов, в качестве метода сравнения применили широко используемый бактериологический тест на гемолиз [5], позволяющий идентифицировать возбудителя сибирской язвы от других видов рода Bacillus. Каждый опыт проводили с соблюдением принципов строго контролируемого эксперимента в соответствии с протоколами медицинских исследований препаратов.

Материалом для исследования служили штаммы чистых культур микроорганизмов, которые были подобраны в Государственной коллекции микроорганизмов ГИСК им. Л. А. Тарасевича и ГосКПБ ФКУЗ РосНИПЧИ «Микроб», в том числе: B. anthracis — 16 штаммов; B. cereus — 8 штаммов; B. subtilis — 8 штаммов; B. megaterium — 6 штаммов; B. thuringiensis — 5 штаммов; B. anthracoides — 5 штаммов. Все штаммы были типичными по культурально-морфоло-гическим, биохимическим и генетическим свойствам.

Испытуемые препараты оценивали по физико-химическим свойствам, чувствительности (минимальное количество сибиреязвенного микроба, выявляемое в исследуемых пробах чистых культур), специфической активности (процент правильно идентифицированных штаммов B. anthracis и выявленных положительных проб объектов окружающей среды и биологического материала к числу контаминированных), специфичность (процент отрицательных результатов при исследовании проб, контаминированных близкородственными микроорганизмами), воспроизводимость (процент совпадений результатов исследования положительных и отрицательных проб), продолжительность анализа в часах.

Учитывая, что сибиреязвенные иммуноглобулины, будут использовать для выявления споровой формы возбудителя сибирской язвы в различных объектах окружающей среды и биологическом материале, особое внимание уделялось подготовке проб из почвы, фуража и мяса крупного рогатого скота. Всего было исследовано 450 проб объектов внешней среды (вода, почва, смывы с объектов внешней среды, корма) и биологического материала (мясо), искусственно контаминированных B. anthracis в концентрациях 1 *106, 1 х107, 1 *108 м. к./мл и близкородственными микроорганизмами (B. subtilis, B. megaterium, B. cereus, B. thuringiensis, B. anthracoides) в концентрации 1*108 м. к./мл.

Микроскопию мазков осуществляли с помощью люминесцентного микроскопа «CarlZeissPrimoStar» под иммерсионным объективом, применяя иммерсионное не флуоресцирующее масло. Оценку результатов при микроскопии приготовленных мазков проводили по 4-крестовой системе. При просмотре 30 и более полей зрения специфическим считали свечение с яркостью на 4 креста (сверкающая флуоресценция зеленовато-желтого цвета оболочки микробной клетки) или 3 креста (яркая флуоресценция зеленовато-желтого цвета оболочки микробной клетки. Свечение с яркостью на 2 или 1 крест (слабое свечение всей клетки) считали неспецифическим и не учитывали.

Результаты и обсуждение

Проведены испытания иммуноглобулинов сибиреязвенных, предназначенных для обнаружения вегетативной и споровой форм B. anthracis в РИФ. При оценке внешнего вида иммуноглобулины в ампуле представляли собой аморфную пористую массу желто-оранжевого цвета. После добавления 0,5 мл очищенной воды содержимое ампул растворялось в течение 1 мин при встряхивании, и имело вид прозрачной опалесцирую-щей жидкости желто-оранжевого цвета. По физико-химическим свойствам препараты соответствовали требованиям нормативной документации.

В результате испытаний сибиреязвенных вегетативных иммуноглобулинов установлено, что их специфическая активность составила 93,8%. При этом из 16 исследуемых штаммов B. anthracis в концентрации 1,0* 108 спор/мл, препарат в рабочем разведении 1:64, выявлял 15, а в разведении 1:128 — только 10 штаммов (62,5%).

Одновременно было показано, что препарат в разведении 1:64 окрашивал 8 штаммов (25%) других видов Bacillus из 32 исследованных. Невысокую специфичность препарата (75%) можно объяснить генетическим родством сибиреязвенного микроорганизма с другими видами рода Bacillus [10].

Определение чувствительности препарата по способности выявлять в рабочем разведении минимальные концентрации сибиреязвенного микроба в мазках из штаммов B. anthracis в концентрациях от 1*104 до 1*108 м. к./мл, позволило установить его высокую чувствительность. При просмотре 30 полей зрения в мазках наблюдали специфическое свечение с интенсивностью на 3-4 креста 1-2 и более микробных клеток B. anthracis в концентрации 5,0*105 м. к./мл.

Анализ результатов, полученных при исследовании проб объектов окружающей среды и биологического материала, подтвердил высокую диагностическую эффективность препарата, который в разведении 1:32 выявлял B. anthracis в вегетативной форме в концентрации 1,0*108 м. к./мл в 100% случаев. Результаты исследований представлены в таблице 1.

По данным технических испытаний сибиреязвенных споровых иммуноглобулинов установлена их высокая чувствительность. Испытуемые иммуноглобулины при просмотре мазков окрашивали с интенсивностью на 3-4 креста от 10 до 20 спор в поле зрения все штаммы в концентрации 1,0* 105спор/мл. При изучении специфической активности иммуноглобулинов на 16 штаммах B. anthracis в концентрации 1,0* 108спор/мл в разведении 1:64 были выявлены 15 штаммов (93,8%), а в разведении 1:128 — 13 штаммов (81,2%). Специфичность сибиреязвенных иммуноглобулинов изучали на 32 штаммах близкородственных микроорганизмов. Полученные данные свидетельствовали о том, что препарат обладает достаточно высокой специфичностью (96,9%). Установлено, что в рабочем разведении 1:64 зарегистрировано свечение на 3 креста только с одним штаммом B. cereus 688В.

Проведение медицинских испытаний препарата показало, что в пробах объектов внешней среды и биологического материала с помощью испытуемого пре-

Таблица 1. Результаты испытаний иммуноглобулинов флуоресцирующих сибиреязвенных вегетативных адсорбированных сухих

Показатель Количество проб Результаты исследований при использовании

РИФ (иммуноглобулины флуоресцирующие в разведении 1:64) теста на гемолиз

Чувствительность (минимальное количество микробных клеток, м. к./мл, B. anthraa’s, выявляемое в РИФ) 5 5,0Х105

Специфическая активность (выявляемые штаммы B. anthraa’s), % 16 93,8 100

Специфичность (отрицательные результаты с близкородственными микроорганизмами), % 32 75 100

Выявляемые штаммы B. anthraa’s в пробах объектов окружающей среды, % 225 100 —

Отрицательные результаты с близкородственными микроорганизмами в пробах объектов окружающей среды, % 225 100 —

Установленные виды микроорганизмов при проведении теста на гемолиз, % 48 100

Воспроизводимость (совпадение результатов исследования положительных и отрицательных проб), % 20 100 —

Время учета результатов, в том числе с учетом подготовки всех материалов — Через 20 ч при исследовании проб чистых культур и 2,5-3 ч при исследовании проб объектов окружающей среды и биологического материала Через 20 ч при исследовании проб чистых культур и 40 ч при исследовании проб объектов окружающей среды и биологического материала

Примечание. (-) — данные отсутствуют. Таблица 2. Результаты испытаний иммуноглобулинов флуоресцирующих сибиреязвенных споровых адсорбированных

Показатель Количество проб Результаты исследований при использовании

РИФ (иммуноглобулины флуоресцирующие в разведении 1:64) теста на гемолиз

Чувствительность (минимальное количество спор, спор/мл, B. anthraa’s, выявляемое в РИФ) 5 5,0 х105

Специфическая активность (процент правильно идентифицированных штаммов B. anthraa’s), % 16 93,8 100

Специфичность (процент отрицательных результатов с близкородственными микроорганизмами), % 32 96,9 100

Выявляемые штаммы B. anthraa’s в пробах объектов окружающей среды, % 225 100 —

Отрицательные результаты с близкородственными микроорганизмами в пробах объектов окружающей среды, % 225 100 —

Процент правильно установленных видов микроорганизмов при проведении теста на гемолиз 48 — 100

Воспроизводимость (процент совпадений результатов исследования положительных и отрицательных проб), % 20 100 —

Время учета результатов, в том числе с учетом подготовки всех материалов, ч — 20 ч при исследовании проб чистых культур и 2,5-3 ч при исследовании проб объектов окружающей среды и биологического материала 20 ч при исследовании проб чистых культур и 40 ч при исследовании проб объектов окружающей среды и биологического материала

Примечание. (-) — данные отсутствуют.

Парата в разведении 1:64 возбудитель сибирской язвы выявлялся в 100% случаев. Кроме этого, в ходе испытаний уточнена методика обеззараживания мазков на этапе их приготовления для исследований.

Результаты исследования иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих сибиреязвенных споровых адсорбированных сухих представлены в таблице 2.

Воспроизводимость результатов с помощью испытуемых иммуноглобулинов изучали при постановке РИФ в разные дни и разными исполнителями. Для этого мазки, приготовленные из штамма В. anthracis (положительные пробы) и из штамма В. cereus (отрицательные пробы), окрашивали испытуемыми иммуноглобулинами в разведении 1:64. Воспроизводимость совпадения результатов при исследовании положительных и отрицательных проб при 10-кратном повторении во всех случаях составила 100%.

Проведенные сравнительные исследования выявили преимущество постановки РИФ с помощью флуоресцирующих вегетативных и споровых иммуноглобулинов перед методом сравнения (тест на гемолиз). Продолжительность проведения исследований с помощью испытуемых иммуноглобулинов составила 20 ч при исследовании проб чистых культур и 2,5-3 ч при исследовании проб объектов окружающей среды и биологического материала; при исследовании проб с помощью теста на гемолиз — 20 ч при исследовании проб чистых культур и 40 ч — при исследовании проб объектов окружающей среды и биологического материала. Приведенные временные затраты в РИФ значительно ниже, чем при проведении исследований бактериологическим методом, что особенно важно при обнаружении возбудителя сибирской язвы из объектов окружающей среды и биологического материала.

На основании данных, полученных в медицинских исследованиях, препараты зарегистрированы в Российской Федерации в качестве изделия медицинского назначения.

1. В ходе изучения установлена высокая специфическая активность исследуемых сибиреязвенных иммуноглобулинов в рабочем разведении 1:64, что подтверждается ярким зеленовато-желтым свечением оболочки микробной клетки интенсивностью на 3-4 креста в 93,8% мазков.

2. Чувствительность препаратов, при которой возбудитель сибирской язвы может обнаруживаться в минимальной концентрации, составила 5,0*105спор/мл.

3. Полученные данные свидетельствовали о том, что препараты обладают достаточно высокой специфичностью по отношению к близкородственным микроорганизмам, которая была отмечена в 75% (вегетативные) и 96,9% (споровые) исследуемых проб. Воспроизводимость постановки РИФ при исследовании положительных и отрицательных проб во всех случаях составила 100%.

4. В исследованиях доказано преимущество проведения РИФ с помощью флуоресцирующих иммуноглобулинов по времени учета результатов — 2,5-3 ч при исследова-

Нии проб объектов окружающей среды и биологического материала против 40 ч методом теста на гемолиз.

5. На основании данных, полученных в медицинских исследованиях, препараты зарегистрированы в Российской Федерации в качестве изделия медицинского назначения. Литература

1. Горобец Е. А. Разработка и получение иммунобиологических препаратов для лабораторной диагностики сибирской язвы // Вестник СГУ: Научный журнал (Ставрополь). 2006. Вып. 47(2). С. 290-292.

2. Еременко Е. И., Рязанова А. Г., Буравцева Н. П. и др. Сибирская язва в Российской Федерации в 2009 году: анализ и прогноз//Здоровье населения и среда обитания. 2010. Вып. 5(206). С. 38-39.

3. Куличенко А. Н., Еременко Е. И., Цыганкова О. И. Современные проблемы сибирской язвы в Российской Федерации // Вестник Российской военно-медицинской академии. 2008. № 2 (22). Ч. II. Приложение. С. 619-620.

4. Куличенко А. Н., Еременко Е. И., Буравцева Н. П., Рязанова А. Г. Диагностика сибирской язвы в Российской Федерации //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2010. № 5. С. 62-66.

5. Лабораторная диагностика для обнаружения сибирской язвы: Методические указания. Ставрополь. 2008. 65 с.

6. Сибирская язва: актуальные проблемы разработки и внедрения медицинских средств защиты / Под ред. Онищенко Г. Г., Кожухова В. В. М.: Медицина, 2010.423 с.

7. Онищенко Г. Г., Кузькин Б. П., Кутырев В. В., Щербакова С. А., Пакскина Н. Д., Топорков А. В. Актуальные направления совершенствования лабораторной диагностики особо опасных инфекционных болезней // Пробл. особо опасных инф. 2010. № 1(99). С. 5-10.

8. Рязанова А. Г., Еременко Е. И., Буравцева Н. П., Цыганкова О. И., Цыганкова Е. А., Аксенова Л. Ю. и др. Эпидемиологическая ситуация по сибирской язве в Российской Федерации: анализ заболеваемости в 2010 г., прогноз на 2011 г. // Пробл. особо опасных инф. 2011. № 1(107). С. 42-45.

9. Саяпина Л. В., Абдрашитова А. С., Лобач Р. Н., Ком-ратов А. В., Малахаева А. Н., Ляшова О. Ю. и др. Диагностическая эффективность иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих сибиреязвенных вегетативных адсорбированных по данным медицинских испытаний // Пробл. особо опасных инф. 2012. № 4 (114). С. 92-96.

10. Хлынцева А. Е., Белова Е. В., Жарникова И. В., Тю-менцева И. С., Куличенко А. Н., Дятлов И. А., Шемякин И. Г. Конструирование тест-системы для селективного концентрирования спор Bacillus anthracis на основе магнитных частиц с иммобилизованными моноклональными антителами // Биотехнология. 2010. № 4. С. 81-83.

11. Цыганкова О. И., Еременко Е. И., Цыганкова Е. А., Буравцева Н. П., Рязанова А. Г. Фенотипические и генетические особенности культурально-морфологических вариантов Bacillus anthracis//Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2008. № 4. С. 6-8.

!а Результаты переаттестации Отраслевого

Ф специфичности и некротической

| активности оспенной вакцины

^ Мухачева А. В., Перекрест В. В., Мовсесянц А. А., Саркисян К. А., Волкова Р. А., Фадейкина О. В.,

С ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения»

Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва

Results of re-certification of reference preparation for determination of activity, specificity and necrotic activity of smallpox vaccine

Muhacheva A. V., Perekrest V. V., Movsesyants A. A.,Sarkisyan K. A., Volkova R. A., Fadeikina O. V.,ShvedovD. V.

Federal State Budgetary Institution «Scientific Center on Expertise of Medicinal Application Products»

Of the Ministry of Health of the Russian Federation, Moscow f->

В статье приведены сведения, полученные в результате переаттестации Отраслевого стандартного образца активности, специфичности и некротической активности оспенной вакцины ОСО 42-28-113-07 (ОСО). Переаттестация проводилась в 2012 году в связи с окончанием его срока действия. Описаны методы исследований, представлены полученные результаты. Отраслевой стандартный образец активности, специфичности и некротической активности оспенной вакцины переаттестован со значением показателя «Специфическая активность» равным (4,9*108±1,89)*108 ООЕ/мл. Также были подтверждены характеристики, аттестованные ранее: специфичность (подлинность) и некротическая активность. Показатели «Специфическая активность» и «Подлинность» на хорионаллан-тоисной оболочке 12-дневных куриных эмбрионов оценивались в сравнении с первым Международным стандартным образцом оспенной вакцины. Проведенная переаттестация ОСО подтвердила возможность его дальнейшего использования. Срок годности до следующей переаттестации составил 3 года.

Ключевые слова: Отраслевой стандартный образец активности, специфичности и некротической активности оспенной вакцины; ОСО 42-28-113-07; специфическая активность, некротическая активность; специфичность (подлинность), первый Международный стандартный образец; аттестация Библиографическая ссылка: Мухачева А. В., Перекрест В. В., Мовсесянц А. А., Саркисян К. А., Волкова Р. А., Фадейкина О. В., Шведов Д. В. Результаты переаттестации Отраслевого стандартного образца активности, специфичности и некротической активности оспенной вакцины//Биопрепараты. 2013. № 4. С.34-40.

The article describes data, which was acquired during the re-certification of branch reference preparation for the determination of the smallpox vaccine activity. The re-certification was carried out in 2012 due to expiration of reference preparation. The test methods and the acquired results are presented. Branch reference preparation for the determination of activity, specificity and necrotic activity of the smallpox vaccine was re-certified with the «specific activity» assigned value of (4,9*108±1,89)*108 pfu/ml. Other certified characteristics were also confirmed. The criteria «Specific activity» and «Identification» were determined using chorioallantoic membrane of 12-days-old chicken embryos and compared against the First International reference preparation of the smallpox vaccine. The re-certification of the branch reference preparation for the determination of activity, specificity and necrotic activity of the smallpox vaccine confirmed the possibility of its further use. The shelf-life before the next recertification is 3 years.

Испытания сибиреязвенных флуоресцирующих иммуноглобулинов, предназначенных для выявления возбудителя сибирской язвы Текст научной статьи по специальности «Прочие медицинские науки»

В работе были изучены чувствительность, специфическая активность и специфичность иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих сибиреязвенных вегетативных и споровых адсорбированных. Установлена высокая специфическая активность исследуемых сибиреязвенных иммуноглобулинов в рабочем разведении 1:64, что подтверждается ярким зеленовато-желтым свечением оболочки микробной клетки интенсивностью на 3-4 креста в 93,8% мазков. Чувствительность препаратов, при которой возбудитель сибирской язвы может обнаруживаться в минимальной концентрации, составила 5,0*10 5 спор/ мл. Полученные данные свидетельствовали о том, что препараты обладают достаточно высокой специфичностью по отношению к близкородственным микроорганизмам, которая была отмечена в 75% (вегетативные) и 96,9% (споровые) исследуемых проб. Воспроизводимость постановки реакция иммунофлуоресценции при исследовании положительных и отрицательных проб во всех случаях составила 100%. В исследованиях доказано преимущество проведения реакции иммунофлуоресценции с помощью флуоресцирующих иммуноглобулинов по времени учета результатов 2,5-3 ч при исследовании проб объектов окружающей среды и биологического материала против 40 ч методом теста на гемолиз. На основании данных, полученных в медицинских исследованиях, препараты зарегистрированы в Российской Федерации в качестве изделия медицинского назначения.

Диагностическая эффективность иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих сибиреязвенных вегетативных адсорбированных по данным медицинских испытаний

Получение поликлональных антител к белкам S-слоя B. anthracis и изучение их специфичности в иммуноферментном анализе

Медицина, 2010.

Cyberleninka. ru

22.01.2018 19:47:53

2018-01-22 19:47:53

Источники:

Https://cyberleninka. ru/article/n/ispytaniya-sibireyazvennyh-fluorestsiruyuschih-immunoglobulinov-prednaznachennyh-dlya-vyyavleniya-vozbuditelya-sibirskoy-yazvy

Энциклопедия лекарств РЛС » /> » /> .keyword { color: red; } Иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие сибиреязвенные споровые

Иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие гриппозные сухие (ИФ-Г)

Иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие гриппозные сухие (ИФ-Г)

Официальный сайт компании РЛС ® . Главная энциклопедия лекарств и товаров аптечного ассортимента российского интернета. Справочник лекарственных препаратов Rlsnet. ru предоставляет пользователям доступ к инструкциям, ценам и описаниям лекарственных средств, БАДов, медицинских изделий, медицинских приборов и других товаров. Фармакологический справочник включает информацию о составе и форме выпуска, фармакологическом действии, показаниях к применению, противопоказаниях, побочных действиях, взаимодействии лекарств, способе применения лекарственных препаратов, фармацевтических компаниях. Лекарственный справочник содержит цены на лекарства и товары фармацевтического рынка в Москве и других городах России.

Запрещена передача, копирование, распространение информации без разрешения ООО «РЛС-Патент», а также коммерческое использование материалов. При цитировании информационных материалов, опубликованных на страницах сайта www. rlsnet. ru, ссылка на источник информации обязательна.

© 2000-2022. РЕГИСТР ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ РОССИИ ® РЛС ®

Все права защищены

li1 m1 r2

Внимание!
Материалы сайта предназначены исключительно для медицинских и фармацевтических работников и носят справочно-информационный характер.
Мы используем файлы cookie. Продолжая, вы соглашаетесь с использованием файлов cookie.

РЕГИСТР ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ РОССИИ РЛС.

Www. rlsnet. ru

15.08.2017 8:34:04

2017-08-15 08:34:04

Источники:

Https://www. rlsnet. ru/pcr_tn_id_8744.htm

Разработка и применение иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих для выявления возбудителей кампилобактериоза, лептоспироза – тема научной статьи по фундаментальной медицине читайте бесплатно текст научно-исследовательской работы в электронной библиотеке КиберЛенинка » /> » /> .keyword { color: red; } Иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие сибиреязвенные споровые

Разработка и применение иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих для выявления возбудителей кампилобактериоза, лептоспироза Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Разработка и применение иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих для выявления возбудителей кампилобактериоза, лептоспироза Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы — Жарникова И. В., Тюменцева И. С., Алиева Е. В., Таран А. В., Жданова Е. В.

В задачу настоящего исследования входило сравнительное изучение методов выделения иммуноглобулинов и подбор оптимальных условий конъюгации иммуноглобулинов, выделенных из гипериммунных кроличьих сывороток, с флуоресцеином изотиоцианатом, а также изучение физико-химических свойств, чувствительности, активности и специфичности конъюгатов. В результате подбора оптимальных методов выделения иммуноглобулинов и условий их конъюгации получены экспериментально-производственные серии иммунофлуоресцирующих лептоспирозных, кампилобактериозных препаратов.

Похожие темы научных работ по фундаментальной медицине, автор научной работы — Жарникова И. В., Тюменцева И. С., Алиева Е. В., Таран А. В., Жданова Е. В.

Биотехнологические разработки высокоактивных и специфичных иммуноглобулинов флуоресцирующих диагностическихпутем применения бифункционального аффинного сорбента

Разработка и апробация тест-системы для обнаружения антител к возбудителю сибирской язвы непрямым методом флуоресцирующих антител

Оптимизация условий получения диагностических флюоресцирующих моноклональных иммуноглобулинов для идентификации холерных вибрионов О1и О139-серогрупп

Разработка и основные этапы внедрения препарата «Иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие холерные О139»

Текст научной работы на тему «Разработка и применение иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих для выявления возбудителей кампилобактериоза, лептоспироза»

РАЗРАБОТКА И ПРИМЕНЕНИЕ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ФЛУОРЕСЦИРУЮЩИХ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ КАМПИЛОБАКТЕРИОЗА, ЛЕПТОСПИРОЗА

И. В ЖАРНИКОВА, И. С ТЮМЕНЦЕВА, Е. В.АЛИЕВА,

А. В.ТАРАН, Е. В.ЖДАНОВА, И. В.ЮРКИНА

Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт, Ставрополь

В настоящее время значительное внимание специалистов привлекает изучение таких инфекций как кампилобактериоз, лептоспироз, что обусловлено их распространением, интенсивной циркуляцией среди людей и животных, значительными показателями заболеваемости и существенным социально-экономическим ущербом от этой инфекции. спорадические случаи кам-билобактериоза, лептоспироза связывают с активацией эпизоотического процесса среди птиц, животных и употреблением населением инфицированных продуктов питания и воды. при эпидемиологическом обследовании традиционные методы индикации (бактериологические) не удовлетворяют требованиям экспрессности, в связи с этим необходимо вести поиск усовершенствования серологических методов диагностики.

Цель данных исследований — разработка и применение высококачественных флуоресцирующих диагностических препаратов для выявления возбудителей кампилобактериоза, лептоспироза.

Для получения полноценных антигенных комплексов лептоспир выбраны штаммы 6 серогрупп (Leptospira Sejroe, Leptospira Pomona, Leptospira Canicola, Leptospira Tarassovi, Leptospira Grippotyphosa, Leptospira Icterohaemorragiae), входящие в типовой диагностический набор штаммов для реакции микроагглютинации и имеющие наибольшее эпидемиологическое и эпизоото-логическое значение [3]. Бакмассы патогенных лептоспир выращивали на среде Ферворта-Вольфа при (28-30)°С в течение 7-10 суток, обеззараживали и использовали в работе [4]. Для получения кампилобактериозных биомасс использовали типичные штаммы кампилобактеров

— С^ерш, С. соК, которые имеют наибольшее значение в этиологии заболевания у людей [1]. Из биомасс извлекали специфичные антигенные комплексы, объединяли, получали полигрупповой водорастворимый антиген, который служил иммуногеном при получении гиперим-мунных сывороток. Иммунизацию проводили по схеме, предложенной Е. Н. Афанасьевым [2]. Активность антигенов, сывороток, иммуноглобулинов определяли методом радиальной иммунодиффузии по О. Оухтерлони. Конъюгацию иммуноглобулинов, фракционированных из сыворотки, проводили с флуоресцеином изотиацио-натом, очистку конъюгата от несвязавшегося красителя осуществляли с использованием сефадекса 0-50 на хроматографической установке.

В задачу настоящего исследования входило сравнительное изучение методов выделения иммуноглобулинов и подбор оптимальных условий конъюгации иммуноглобулинов, выделенных из гипериммунных кроличьих сывороток, с флуоресцеином изотиоцианатом (количество флуорохрома, значения рН и температуры реакционной смеси, времени конъюгации, определение влияния молярных отношений Мф/Мб на серологическую активность конъюгатов), а также изучение физико-химических свойств, чувствительности, активности и специфичности конъюгатов.

Материалы и методика. Для конъюгации с флуоресцеином изотиоцианатом (ФИТЦ) были использованы иммуноглобулины, преципитированные следующими методами: сульфатным, полиэтиленгликоль (ПЭГ-6000), каприловой кислотой.

Для метки ФИТЦ использовали раствор иммуног-

МЕДИЦИНСКИЙ ВЕСТНИК СЕВЕРНОГО КАВКАЗА, № 1 2006

Лобулинов с концентрацией белка 10-25 мг/мл. Краситель добавляли медленно к раствору белка при постоянном помешивании. Присоединение ФИТЦ к белку всегда происходит в щелочной среде. По данным литературы, наилучшими условиями являются показатели рН — 8,59,0. Используя 0,1 М фосфатный буферный раствор, мы изучили значения рН 8,5; 9,0; 9,5 и две нагрузки красителя: 20 мг и 25 мг на 1 г белка. Время контакта красителя с белком в наших экспериментах составляло 1; 2; 4; 12 часов. Температурный режим конъюгации: 40С, 200С и 370С. Конъюгацию иммуноглобулинов проводили при постоянном перемешивании на магнитной мешалке. Коньюгаты освобождали от несвязавшегося флюорохрома гель-фильтрацией на колонках с сефадексом О-50 или 0-25 с последующим элюированием конъюгата 0,1 М фосфатным буферным раствором (рН 8,5; 9,0; 9,5 соответственно рН конъюгации). Концентрацию белка определяли спектрофотометрически при длине волн 280 нм (область максимального поглощения для белка) и 495 нм (область максимального поглощения для ФИТЦ). Концентрацию белка и молярное соотношение флуоро-хром/белок рассчитывали по формулам:

(Б^ — 0,37х0495) х 50 Х = 1п, где

Э280 — оптическая плотность раствора при длине волны 280 нм;

Э495 — оптическая плотность раствора при длине волны 495 нм;

0’280 — оптическая плотность 1 % раствора иммуноглобулина (для кроличьего равная 12,0);

50 — разведение препарата.

Молярное соотношение ФИТЦ/белок вычисляли по формуле:

2,86 х 0495 ФИТЦ/белок = 1п, где

0280 — ( 0,37х 0495)

0280 — оптическая плотность раствора при длине волны 280 нм;

0495 — оптическая плотность раствора при длине волны 495 нм;

0,37 и 2,86 — расчетные коэффициенты.

Флуоресцирующие конъюгаты должны обладать высокой специфичностью, т. е. взаимодействовать только с гомологичным антигеном и сообщать яркую флуоресценцию образующемуся комплексу. Для этого немаловажной задачей является качественная очистка флуоресцирующего конъюгата от несвязавшегося красителя. После окончания конъюгирования в реакционной смеси, кроме меченого белка, содержится значительное количество непрореагировавшего флуорохрома, флуоресцирующие примеси. Это низкомолекулярные вещества с молекулярной массой около 300 дальтон. По стандартной методике для их удаления применяется очистка на колонке с сефадексом 0-50. Полноту очистки от несвязавшегося флуорохрома определяли методом восходящей хроматографии на бумаге по стандартной методике. На хроматограмме получали одно яркое флуоресцирующее пятно, что свидетельствовало об отсутствии свободного флуорохрома.

Оценку результатов специфической активности и

Специфичности конъюгатов определяли на фиксированных мазках гомологичных и гетерологичных штаммов прямым методом окраски препаратов. Полученные флуоресцирующие иммуноглобулины — кампилобакте-риозные, лептоспирозные разводили 1:2 0,9% раствором хлорида натрия рН 7,2 и титровали в этом же растворе двукратными разведениями до разведения 1:512. На фиксированные мазки наносили разведения иммуноглобулинов и инкубировали 15-20 мин. во влажной камере при температуре (22+4)0С. Затем промывали препараты в 0,9 % растворе хлорида натрия по 10 минут, подсушивали на воздухе. Готовые препараты исследовали, предварительно нанеся на них каплю нефлуоресцирующего масла. Микроскопию препаратов проводили в падающем отраженном свете в люминесцентном микроскопе серии «Люмам», используя соответствующие фильтры согласно инструкции по эксплуатации прибора. За положительный результат принимали яркую (4+, 3+) флуоресценцию периферии микробных клеток. При исследовании полученных флуоресцирующих иммуноглобулинов в реакции иммунофлуоресценции титр составил 1:16-1:128.

Результаты. Всего было проанализировано по 5 серий иммуноглобулинов флуоресцирующих с концентрацией белка 0,9 — 1,1 % и молярным отношением Мф/Мб от 3,8 до 11,0. Установлено, что на степень связывания иммуноглобулинов с красителем влияют рН реакционной смеси и концентрация флуорохрома. Было отмечено, что после добавления красителя в первые минуты происходит снижение рН среды на 1,0 +0,2, затем на протяжении 25-30 минут продолжается дальнейшее снижение рН среды на 0,3-0,5. При этом степень конъюгации белка с ФИТЦ уменьшается прямо пропорционально снижению значения рН реакционной смеси, и значительная часть красителя не вступает в реакцию с белком. В связи с этим важен контроль показателей рН и проведение их корректировки в первые минуты после добавления ФИТЦ и через 30 минут после начала метки.

Наилучшие серии конъюгатов были получены в наших экспериментах при значении рН реакционной смеси 9,5, при использовании нагрузки ФИТЦ — 20 мг на 1 г белка, температуре 200С и 4-х часовом контакте белка с красителем. Оптимальной концентрацией белка полученных флуоресцирующих иммуноглобулинов является (10+1) мг/мл, молярное соотношение флуорохром/белок

Активность вышеперечисленных препаратов испытывалась на нативных свежеприготовленных взвесях культур трёх-пяти гомологичных штаммов каждого вида возбудителя в пяти повторностях в концентрации 5х108 м. к/мл.

Установлено, что специфическая активность препаратов всех приготовленных серий характеризовалась красящим титром, равным разведению 1:32 — 1:128 при исследовании мазков гомологичных возбудителей, рабочее разведение препаратов — 1:16 — 1: 64.

При контроле специфичности установлено отсутствие специфической иммунофлуоресценции у всех гетерологичных микроорганизмов, взятых в опыт и окрашенных рабочим разведением флуоресцирующих им-муногло булинов.

Для определения чувствительности флуоресцирующих иммуноглобулинов использовали гомологичные штаммы в следующих концентрациях: 5х106; 1х106; 5х10 5; 2,5х105; 1х105; 5х104 м. к./мл. Установлено, что разведение испытанных серий препаратов давало воз-

Можность обнаруживать микробы в мазках из чистых культур, приготовленных из 2,5х105 и более микробных клеток в 1 мл. С помощью всех серий удалось выявить (не во всех полях зрения) единичные бактерии в мазках, приготовленных из взвесей, содержащих 5х104 м. к./мл.

Оценка физико-химических свойств флуоресцирующих иммуноглобулинов (внешний вид, растворимость, прозрачность, цветность, рН, потеря в массе при высушивании, концентрация белка, количественное соотношение ФИТЦ/белок), активность и чувствительность показала их соответствие основным медико — биологическим требованиям, предъявляемым к подобным препаратам.

Заключение. Таким образом, нами отработаны оптимальные условия получения иммуноглобулинов флуоресцирующих: метод выделения иммуноглобулинов для метки ФИТЦ — осаждение каприловой кислотой, значение рН реакционной смеси 9,5, при использовании нагрузки ФИТЦ 20 мг на 1 г белка, температуре 200С, 4-х часовом контакте белка с красителем. В результате подбора оптимальных методов выделения иммуноглобулинов и условий их конъюгации получены экспериментальнопроизводственные серии иммуно-флуоресцирующих лептоспирозных, кампилобактериозных препаратов, характеризующиеся красящим титром 1:32-1:128 при исследовании мазков гомологичных возбудителей. Все полученные серии диагностикумов отвечали ОМБТ, предъявляемым к флуоресцирующим препаратам.

Данные кампилобактериозные препараты прошли апробацию в лабораторных и полевых условиях (в городах Пятигорске, Железноводске и Ессентуках). Лептоспирозные препараты были апробированы при исследовании материала в Красногвардейском районе Ставропольского края. Обследовались сточные воды и воды открытых водоемов на наличие в них возбудителей. Данные препараты зарекомендовали себя как высокоактивные, специфичные и экспрессные.

Список использованной литературы:

1. Алиева, Е. В. Кампилобактериоз. Лабораторная диагностика (Обзор литературы) / Е. В. Алиева. — Ставрополь, 2004. — 16 с.

— Деп. в ВИНИТИ 15.07.04, №1227- В2004.

2. Афанасьев, Е. Н. Научно-методические аспекты экспресс-диагностики возбудителей особо опасных зоонозных инфекций (чума, бруцеллез, сибирская язва): Автореф. дис. . / Е. Н. Афанасьев. — Ставрополь, 2000.- 42 с.

3. Бинатова, В. В. Методы люминесцентной диагностики лептоспироза / В. В. Бинатова, И. С. Тюменцева, Е. Н. Афанасьев, В. И. Ефременко, Т. И. Егшатян // Проблемы развития биолог. и химии на Северном Кавказе. Матер. науч. конф.,посвящ. 70 летию биолого-химического факультета. — Ставрополь, 2001. — С.11-12.

4. Жарникова, И. В. Методологические подходы и разработка

Биотехнологии иммунобиологических препаратов для диагностики инфекционных, особо опасных заболеваний и детекции их возбудителей: Автореф. дис. . / И. В. Жарникова.

— Ставрополь, 2004.- 39 с.

РАЗРАБОТКА И ПРИМЕНЕНИЕ ИММУНОГЛОБУЛИНОБ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ФЛУОРЕСЦИРУЮЩИХ ДЛЯ ЕЫЯЕЛЕНИЯ 8ОЗБУДИТЕЛЕЙ КАМПИЛОБАКТЕРИОЗА, ЛЕПТОСПИРОЗА

И. В.ЖАРНикоВА, и. С.тюМЕНЦЕВА, Е. В.АлиЕВА,

А. в.таран, е. в.жданова, и. в юркина

В задачу настоящего исследования входило сравнительное изучение методов выделения иммуноглобулинов и подбор оптимальных условий конъюгации иммуноглобулинов, выделенных из гипериммунных кроличьих сывороток, с флуо-ресцеином изотиоцианатом, а также изучение физико-химических свойств, чувствительности, активности и специфичности конъюгатов. В результате подбора оптимальных методов выделения иммуноглобулинов и условий их конъюгации получены экспериментально-производственные серии иммунофлуоресцирующих лептоспирозных, кампилобактериозных препаратов.

Ключевые слова: кампилобактериоз, лептоспироз, иммуноглобулины, флуоресцеин изотиационат.

УДК (579.834.115.+ 579.84):612.42.017.1-07

OBTAINING AND USE OF DIAGNOSTIC FLUORESCENT

IMMUNOGLOBULINS FOR CAMPILOBACTERIOSIS AND

LEPTOSPIROSIS PATHOGENIC AGENTS EXPOSURE

ZHARNiKoVA i. V., TuMENTsEVA i. s., ALiYEVA Y. V.,

Taran a. v., zhdanova y. v., yurkina i. V.

At present studying of such infections as campilobacteriosis and leptospirosis attract attention of the specialists.

The aim of the study was to obtain and use high-quality fluorescent diagnostic preparations for the exposure of campilobacteriosis and leptospirosis pathogenic organisms. The purpose of our investigation included comparative study of immunoglobulin isolation methods and selection of optimal conditions for conjugation between immunoglobulins from rabbit hyperimmune serum and fluorescein isothiocianat, and also study of physicochemical characteristics, sensibility, activity and specificity of conjugates.

Results. Selection of optimal immunoglobulin isolation methods and conditions for conjugation made it possible to work out experimental industrial series of immunofluorescent leptospirosis and campylobacteriosis preparations.

Key words: campylobacteriosis, leptospirosis, immunoglobulins, fluorescein isothiocianat.

Разработка и применение иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих для выявления возбудителей кампилобактериоза, лептоспироза Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

В задачу настоящего исследования входило сравнительное изучение методов выделения иммуноглобулинов и подбор оптимальных условий конъюгации иммуноглобулинов, выделенных из гипериммунных кроличьих сывороток, с флуоресцеином изотиоцианатом, а также изучение физико-химических свойств, чувствительности, активности и специфичности конъюгатов. В результате подбора оптимальных методов выделения иммуноглобулинов и условий их конъюгации получены экспериментально-производственные серии иммунофлуоресцирующих лептоспирозных, кампилобактериозных препаратов.

Биотехнологические разработки высокоактивных и специфичных иммуноглобулинов флуоресцирующих диагностическихпутем применения бифункционального аффинного сорбента

Разработка и апробация тест-системы для обнаружения антител к возбудителю сибирской язвы непрямым методом флуоресцирующих антител

Оптимизация условий получения диагностических флюоресцирующих моноклональных иммуноглобулинов для идентификации холерных вибрионов О1и О139-серогрупп

Разработка и основные этапы внедрения препарата «Иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие холерные О139»

МЕДИЦИНСКИЙ ВЕСТНИК СЕВЕРНОГО КАВКАЗА, 1 2006.

Cyberleninka. ru

18.01.2018 1:31:24

2018-01-18 01:31:24

Источники:

Https://cyberleninka. ru/article/n/razrabotka-i-primenenie-immunoglobulinov-diagnosticheskih-fluorestsiruyuschih-dlya-vyyavleniya-vozbuditeley-kampilobakterioza

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.